FINES project goes ex vivo

Уважаемые читатели!

   Если вы думаете, что наш FINES Project проект потихоньку канает в лету, то вы, конечно, заблуждаетесь. Летом у нашей группы был перерыв в деятельности, но сейчас она продолжается.
   Во-первых, благодаря помощи svadam у нас есть очищенные позитивные контроли – пирацетам и фенотропил.
   Во-вторых, лаборатория, в которой мы собираемся проводить исследования, сделала нам заманчивое предложение - провести предварительный скрининг наших соединений ex vivo на срезах гиппокампа для того, чтобы выявить, обладают ли вещества действием на нервные клетки.
   Наше первоначальное исследование предполагало следующие этапы базового эксперимента:
   1) синтез 3 химических зондов (экспериментальных веществ) и покупку позитивных контролей;
   2) сравнительное испытание позитивных контролей и экспериментальных веществ в опытах по изучению угасанию условного рефлекса пассивного избегания (УРПИ) в условиях естественного забывания на 1, 7 и 14 сути после введения препарата;
   3) сравнительное испытание позитивных контролей и экспериментальных веществ в опытах по изучению угасания УРПИ в условиях кетаминовой амнезии.
   У нас были намечены также и дополнительные этапы: изучение проницаемости веществ через гематоэнцефалический барьер in vitro, изучение влияния веществ на психику в условиях хронического эксперимента (в том числе и изучение аддиктивного потенциала), а также синтез других рацетамов и их скрининг in vivo в тесте УРПИ.
   Нам предлагают первым этапом провести детальное изучение веществ не в живом организме, а на срезах мозга, а точнее – на срезах гиппокампа. Срезы помещаются в специальный раствор, который насыщается карбогеном (95 % кислорода, 5 % углекислого газа). Раствор омывает срезы и поддерживает жизнеспособность нервных клеток. Далее эти среды подвергают определённой стимуляции электрическим током и фиксируют ответ, возникающий в нервных клетках. Суть эксперимента будет заключаться в определении того, как добавляемые в перфузат вещества (т.е. позитивные контроли и экспериментальные вещества) изменяют этот ответ.
   Эти скрининговые испытания будут проходить в 3 этапа:
   Этап № 1.
   К определённым участкам среза подводят электроды и подвергают стимуляции по специальной схеме.
   Эта стимуляция может вызвать, а может и не вызвать определённые ответы в нервных клетках другого участка гиппокампа. В первом случае говорят, что вещество обладает нейротропной активностью, и оно переходит во следующий тур. Во втором случае вещество нейтротропной активностью не обладает и уходит на скамейку запасных. Каждое из веществ будет проверено в 3 концентрациях, при выборе которых мы будем руководствоваться данными, полученными при изучении фармакокинетики пирацетама и фенотропила на крысах.
   Этап № 2.
   Этот этап отличается от первого тем, что меняется схема стимуляции нервных клеток. Характеристики подводимого к гиппокампу тока выбираются такими, чтобы стимуляция вызывала долговременную потенциацию, которая на сегодняшний день является, как полагают, физиологической основой памяти. Если вещество не оказывает на её формирование никакого влияния, что будет зафиксировано измерительным оборудованием, то и вероятность того, что вещество проявляет промнестическую активность (т.е. будет стимулировать память у животных), мала. Вещества, проявившие активность, проходят в этап № 3, а вещества, которые не усиливают долговременную потенциацию, занимают места рядом с болельщиками.
   Этап № 3.
   Это, наверное, самый интересный этап. Мы надеемся, что с вашей помощью дойдём до него.
   Он проводится как и этап № 2 с той разницей, что в перфузат вместе с исследуемыми веществами добавляются блокаторы тех или иных рецепторов. Если при этом способность вещества усиливать долговременную потенциацию понижается, то это означает, что исследуемые вещества усиливают долговременную потенциацию путём воздействия на эти рецепторы. Такое исследование носит название «ингибиторный анализ».
   Что даст нам такое исследование:
- позволит быстро отсеять неактивные вещества и сэкономить средства на экспериментальных животных;
- оценить концентрацию, при которой может воздействовать то или иное вещество;
- выявить те рецепторы, посредством которых исследуемые вещества могут влиять на память;
- грубо прикинуть, каким из факторов – фармакокинетическим или фармакодинамическим – может быть обусловлена разница в лечебных дозах между пирацетамом и фенотропилом. Если, к примеру, окажется, что пирацетам и фенотропил стимулируют долговременную потенциацию в одинаковой степени, то это будет косвенным подтвеержденим того, что фенотропил действует сильнее, так как он быстрее и в больших количествах проникает в мозг.
   Предлагаемый нам эксперимент является многоступенчатым и длительным (правда, это не является для нас критичным), и поэтому недешёвым. Мы соглашаемся на этот эксперимент, хотя он существенно изменит структуру нашего проекта. Соответственно на IdieGoGo мы будем просить больше денег, и финансовый план будет выглядеть следующим образом: